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莫 冰 余克花 黎 帆 宋况余 2005-12-13 13:31:36 中华中西医杂志 2004年10月第5卷第20期
Mo Bing，Yu Kehua，Li Fan，et al.
Jiangxi Medicial College Pathogenic Organisms Department，Jiangxi330000.
【Abstract】 Objective To evaluate the usefulness of endocervical Gram stain smears in the diagnosis of Chlamydia trachomatis.Methods 312females attending a STD clinic and endocervical specimens submitted for direct fluorescent antibody testing（DFA）.Endocervical smears were also collected for Gram stain.The number of polymorˉphonuclear leucocytes（PMN）per high power field（HPF）.Results Both cutoff of10，the number of polymorphonuˉclear leucocytes per high power field（PMN/HPF）and cutoff of20PMN/HPF were statistically significant indepenˉdent indicators for the presence of C.trachomatis（P<0.02and P<0.01respectively）.Conclusion The use of endocervical Gram smear results together with clinical information can be used to identify high risk women for C.traˉchomatis infection.
Key words Gram stain polymorphonuclear leucocytes Chlamydia trachomatis
沙眼衣原体常引起女性生殖系统感染，但是大部分女性感染者无临床症状，也不被发现，一般到医院就诊的女性不易排除这种感染。由于衣原体的检测对实验室要求较高，并且耗时费钱，宫颈分泌物的革兰染色是一种便宜而又较易操作的妇科常规检查法，本研究评价了宫颈分泌物的革兰染色在诊断衣原体中的作用。
1 材料与方法
1.1 标本来源 312例女性，年龄18～40岁，为本市各医院皮肤性病科和妇产科来我室检查的患者。
1.2 实验方法
1.2.1 试剂 沙眼衣原体单克隆抗体免疫荧光试剂盒为中国人民解放军预防医学中心的产品;衣原体抗原检测试剂盒为美国美迪生物技术有限公司的产品。
1.2.2 标本采集 子宫颈检查，观察子宫颈的分泌物的性状。用棉签擦拭宫颈口，涂两张玻片，在空气中自干，一张做革兰染色，另一张用做衣原体直接免疫荧光法检测，并取一宫颈拭子作衣原体抗原检测。
1.2.3 宫颈分泌物革兰染色 观察革兰染色涂片，记录每油镜（1000×）视野下的白细胞数、细菌、真菌、红细胞和线索细胞。如高倍镜视野（400×）中包含100个以上的上皮细胞的样品被拒绝使用，因为这些样品可能被阴道分泌物污染。每样品记录油镜视野下白细胞数。样本白细胞数为5个视野细胞数的平均，并且被分成<5、5～10、11～20、20～30和>30五档。
1.2.4 衣原体直接免疫荧光法检测（DFA） 涂片标本自然干燥，甲醇固定10min，然后于空气中充分挥发。加衣原体单克隆荧光抗体，置湿盒中，37℃30min。磷酸缓冲盐冲洗甩干，滴加磷酸甘油，荧光显微镜镜检观察。镜下见亮绿色，典型大小，边缘清晰的圆形颗粒于上皮细胞内或细胞外数量较多者为阳性。
1.2.5 衣原体抗原抗原检测 按试剂盒提供的操作方法操作。
1.3 统计学方法 数据用卡方检验进行分析，P<0.05被认为有统计学意义。
2 结果
312例患者中198份涂片标本被接受，没有接受的标本是由于所取的分泌物每高倍镜视野中上皮细胞>100个，标本被阴道分泌物污染。衣原体的感染率为27.8%（55/198）。在衣原体阳性样本中，有3例衣原体DFA和衣原体抗原抗原检测的结果不同，1例DFA而衣原体抗原抗原检测法阳性阴性，2例DFA而衣原体抗原抗原检测法阳性，52例两者都阳性，143例两者都检测阴性。后面研究基于这55份衣原体标本。根据宫颈分泌物白细胞数将革兰涂片结果分成数层评估其在诊断沙眼衣原体的作用。
表1 宫颈分泌物白细胞数与衣原体感染情况分析宫颈分泌物(略)
分别以宫颈分泌物每油镜视野白细胞数5、10、20和30为分界比较衣原体的感染情况。结果显示，宫颈分泌物白细胞≥10和≥20作为判定点比较衣原体感染情况均差异有显著性（P<0.02和P<0.01），如以宫颈分泌物白细胞≥10作为衣原体诊断标准，其敏感性为38.2%，特异性为 76.2%;如以宫颈分泌物白细胞≥20作为衣原体诊断标准，敏感性为34.5%，特异性为84.6%。详见表1。宫颈分泌物为脓性的61例（30.8%），宫颈分泌物白细胞数、宫颈分泌物性状和衣原体感染的相关见表2。
表2 脓性宫颈分泌物患者白细胞数与衣原体感染情况分析表宫颈分泌物白细胞数 (略)
宫颈分泌物白细胞数≥10合并分泌物脓性者，衣原体感染率差异有显著性，如果作为衣原体的诊断标准，特异性可被接受，但敏感性都较低。
3 讨论
及早发现衣原体感染对于减少衣原体感染的相关疾病———输卵管炎、不孕症、宫外孕和新生儿肺炎结膜炎是非常重要的 ［1，2］ 。本研究的目的在于阐明妇科常规检查———宫颈分泌物的革兰染色在衣原体感染的诊断的作用。国外一些研究结果支持使用宫颈分泌物革兰染色筛选衣原体感染的高危女性。Brunham ［3］ 等报告宫颈分泌物白细胞数>10与衣原体感染相关。Katz ［4］ 报告分泌物白细胞数>10的女性衣原体培养的阳性率是分泌物白细胞数<10女性的2倍，但不能找一个合适的诊断标准。Moscicki ［5］ 认为分泌物白细胞数>5为标准能有效的判断是否有衣原体感染。Knud-Hansen ［6］ 证实宫颈涂片和白细胞酯酶在诊断衣原体感染的有限作用，他们也不能寻找到一个合适的分泌物白细胞数作为衣原体的诊断标准。我们结果显示宫颈分泌物白细胞≥10和≥20作为判定点比较衣原体感染情况均差异有显著性，但以此作用衣原体的诊断标准敏感性低，不能有效的指示衣原体感染。我们评估了涂片结果、分泌的性状与衣原体感染的关系。结果发现宫颈分泌物白细胞数>10合并宫颈有脓性的与衣原体感染显著相关，特异性高，但敏感性不高。
总之，我们的结果不支持单独用宫颈分泌物涂片结果判断是否有衣原体感染。然而，它们可用于识别衣原体感 染和需要早期治疗的高危人群，当患者宫颈分泌物白细胞数>10，特别是合并分泌物脓性的，应进一步检测排除衣原体感染。特别在缺乏先进的衣原体诊断设备的农村地区，通过宫颈分泌物的革兰染色结果指示衣原体感染很有参考价值。
参考文献
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3 Brunham RC，Paavonen J，Stevens CE，et al.Mucopurulent cervicitis-the ignored counterpart in women of urethritis in men.N Engl J Med，1984，311:1-6.
4 Katz B，Caine V，Jones R.Diagnosis of mucopurulent cervicitis among women at risk for Chlamydia trachomatis infection.Sex Transm Dis，1989，16:103-106.
5 Moscicki B，Shafer MA，Millstein SG，et al.The use and limitations of endocervical Gram stains and mucopurulent cervicitis as predictors for Chlamydia trachomatis in female adolescents.Am J Obstet Gynecol，1987，157:65-71.
6 Knud-Hansen C，Dallabetta G，Reichart C，et al.Surrogate methods to diagnose gonococcal and Chlamydial cervicitis:comparison of leukocyte esterase dipstick，endocervical Gram stain，and culture.SexTransm Dis，1991，18211-18216.
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